番茄原產(chǎn)于南美西部高原，屬喜聞溫蔬菜，對溫度比較敏感。研究表明，番茄的整個(gè)生長(cháng)發(fā)育過(guò)程中，生殖生長(cháng)時(shí)期對溫度敏感，這主要是因為花粉發(fā)育時(shí)期尤其是減數分裂和配子形成時(shí)期是植物生殖過(guò)程中高敏感階段，高溫容易造成花粉敗育，從而導致授粉受精不良、座果率下降、畸形果率升高等問(wèn)題。應對全球變暖這一嚴峻的環(huán)境問(wèn)題，授粉前對花粉活性進(jìn)行檢測和篩選，則成為番茄產(chǎn)量和品質(zhì)的重要保障。

本實(shí)驗利用Ampha Z32花粉活力分析儀（IFC法）測試了采自多個(gè)國家的1000份番茄花粉的活性。圖1為1000份花粉活性的百分比堆積柱狀圖，其中綠色為活性花粉占比，紅色為死亡花粉的占比，紅圈內為Ampha Z32花粉活力分析儀測量得到細胞散點(diǎn)云圖。如圖所示，圖中左側樣本的花粉活性幾乎達到了100%，右側樣本的花粉活性幾乎為0%，細胞散點(diǎn)云圖中清晰區分出活性細胞類(lèi)群和失活細胞類(lèi)群。對于第900-1000個(gè)樣本的花粉活性小于10%，不適用于育種或種子生產(chǎn)，將直接被淘汰。

圖1花粉活性百分比堆積柱狀圖

此外，本實(shí)驗還利用體外萌發(fā)法驗證了該方法的可靠性，分別采用標準發(fā)芽瓊脂培養基和改良的液體發(fā)芽緩沖液進(jìn)行培養。如圖2所示，對于IFC法測量的活力大于80%的花粉，使用標準瓊脂培養基進(jìn)行培養，花粉的萌發(fā)率小于20%，二者差異顯著(zhù)；而使用改良后的萌發(fā)緩沖液，花粉的萌發(fā)率明顯增高且與IFC法測量結果一致。由此可見(jiàn)，番茄花粉的萌發(fā)受培養基類(lèi)型的影響差異較大，選擇合適的培養基是準確判斷花粉萌發(fā)率的前提，在合適的培養條件下，IFC法與體外萌發(fā)法一致性極高，是一種可靠、便捷的測試方法。

圖2. IFC法與體外萌發(fā)法的相關(guān)性分析

標準發(fā)芽瓊脂培養基(■)和改良的液體發(fā)芽緩沖液(●)。藍色和綠色虛線(xiàn)分別代表相應的相關(guān)性方程和相關(guān)系數，Y誤差線(xiàn)表示萌發(fā)法的標準偏差，X誤差線(xiàn)表示IFC法的標準偏差。

對比1000份番茄花粉的活性散點(diǎn)圖（橫坐標為相對活性，縱坐標為相對大?。?，我們發(fā)現大部分花粉的活性散點(diǎn)圖，失活細胞相較于活性細胞可劃分為兩個(gè)部分，一部分細胞的位置與活性細胞一致，而另一部分則明顯低于活性細胞，結合顯微鏡鏡檢，我們發(fā)現這部分位置靠下的細胞體積較小且形狀不規則。由此，我們將花粉細胞三個(gè)類(lèi)群：成熟的活花粉，成熟的死花粉以及異?；ǚ?，如圖3所示。

圖3. 花粉的活性散點(diǎn)圖中的花粉類(lèi)別

為進(jìn)一步了解異?；ǚ蹖ǚ刍钚缘挠绊?，本實(shí)驗研究了1000個(gè)樣本中，異?；ǚ墼谑Щ罨ǚ壑械恼急纫约爱惓；ǚ墼谡麄€(gè)花粉樣本中的占比。

圖4.異?；ǚ墼谒劳龌ǚ壑械恼急扰判驁D

圖4為異?；ǚ墼谑Щ罨ǚ壑械恼急扰判驁D，紅色為成熟的死花粉，藍色為異?；ǚ?。如圖可見(jiàn)，這1000個(gè)樣本基本都含有異?；ǚ?，其中有10%的樣本，異?；ǚ墼谑Щ罨ǚ壑械恼急冗_到了40%以上。

圖5. 異?；ǚ墼谡麄€(gè)樣本中的占比

圖5為異?；ǚ墼谡麄€(gè)樣本中的占比，從圖中我們可以看出，對于大多數樣本來(lái)說(shuō)，異?；ǚ鄣恼急燃s為5%，而個(gè)別樣本的異?；ǚ蹍s超過(guò)了50%，甚至達到了87.3%。顯然，異?；ǚ凼菍е逻@部分樣本花粉活力降低的主要因素。這些異?；ǚ壑饕獮榛ǚ郯l(fā)育的過(guò)程產(chǎn)生空花粉、不育花粉、退化花粉、損傷花粉或畸形花粉，它們體積較小，形狀皺縮不規則，與花粉發(fā)育過(guò)程中受到的脅迫，尤其是熱脅迫密切相關(guān)，可作為判斷番茄在生長(cháng)中是否受到脅迫的指標。

最后，本實(shí)驗通過(guò)對比1000份番茄花粉的活性散點(diǎn)圖，按散點(diǎn)圖類(lèi)型進(jìn)行了分類(lèi)，如圖6，總體可分為四類(lèi)：1）花粉活性較高，且幾乎沒(méi)有異?；ǚ?；2）花粉活性適中，基本沒(méi)有異?；ǚ?；3）花粉活性非常低，基本沒(méi)有異?；ǚ?；4）花粉活性中等，但含有大量的異?；ǚ?。根據以上結果，我們可以在今后的番茄生產(chǎn)過(guò)程中，盡可能的篩選活性高且無(wú)異常細胞的優(yōu)質(zhì)花粉進(jìn)行授粉；以異?；ǚ鄣恼急茸鳛榉焉L(cháng)是否受到脅迫的重要指示，幫助及時(shí)調整生產(chǎn)環(huán)境；此外，還可以幫助我們進(jìn)行耐熱抗旱品系篩選。

圖6. 不同質(zhì)量的番茄花粉散點(diǎn)圖

本實(shí)驗表明Ampha Z32花粉活力分析儀（IFC法）無(wú)需染色等預處理，能夠快速、高通量、準確測量花粉活性，并且可以通過(guò)對比篩選出優(yōu)質(zhì)花粉，是一種可靠的測試方法，可為番茄產(chǎn)量和品質(zhì)的重要保障。

本次實(shí)驗由瑞士Amphasys公司應用科學(xué)家和荷蘭瑞克斯旺種苗集團公司（Rijk Zwaan）的育種團隊共同完成。